| Tema |
Subtema |
| 1. Introducció |
Perspectiva històrica. Característiques principals dels enzims. Interaccions enzim-substrat. Coenzims, cofactors. Principis de nomenclatura dels enzims. |
| 2. Purificació i caracterització de proteïnes (enzims) |
Selecció de la font de proteïna. Estratègia general de purificació proteica. Homogenització. Centrifugació diferencial. Solubilització de les proteïnes: concentració salina, solvents orgànics, efecte del pH. Separacions cromatogràfiques: filtració en gel, intercanvi iònic, afinitat. Electroforesi: paper, gel, SDS-PAGE. Isoelectroenfoc. Ultracentrifugació. |
| 3. Cinètica enzimàtica I |
Velocitat de reacció, conceptes bàsics. Activitat enzimàtica. Tècniques instrumentals d’anàlisis de l’activitat enzimàtica. Mètodes continus i discontinus. La cinètica enzimàtica coma a mètode per a comprendre el mecanisme. Condicionants de la velocitat de reacció. pH òptim. Temperatura òptima. Estabilitat tèrmica. |
| 4. Cinètica enzimàtica II |
Equació de Michaelis-Menten. Paràmetres cinètics: velocitat màxima, constant de michaelis. Eficiència catalítica. Anàlisis de dades cinètiques: gràfic de Lineweaver-Burk o de dobles recíproques. Reaccions revesibles. Relacióde Haldane. |
| 5. Inhibició enzimàtica |
Inhibició reversible i irreversible. Tipus d’inhibició: competitiva, no competitiva, acompetitiva, mixta. Inhibició per excés de substrat. |
| 6. Reaccions bisubstrat |
Mecanisme seqüencial: ordenat a l’atzar. Mecanisme ping-pong. Anàlisi del mecanisme de reacció bisubstrat mitjançant gràfiques de Lineweaver-Burk. Anàlisi del mecanisme de reacció bisubstrat mitjançant el tipus d’inhibició induïda pels productes de reacció. |
| 7. Enzims al•lostèrics |
Cooperativitat. Equació de Hill sobre la descripció de la corba de fixació enzim-substrat. Efecte d’un activador. Equació d’Adair. Model concertat de Monod, Wyman i Changeux (MWC). Enzims al•lostèrics tipus K, tipus V. Model seqüencial de Koshland, Némethy i Filmer. |
| 8. Mecanismes catalítics |
Tipus de catàlisi: àcid-base, covalent, per ions metal•lics. Efecte de proximitat i orientació. Exemples de mecanismes de reacció: lisozima, proteases, serin-proteases. |
| 9. Regulació de l’activitat enzimàtica |
Expressió gènica. Isoenzims. Regulació per concentració de substrat. Interaccions entre subunitats. Modificacions covalents d’enzim. Retroinhibició. Zimògen, ruptura proteolítica. Enzims i el control del metabolisme. |
| 10. Ribozimes |
El RNA i activitat ezimàtica: mecanisme de catàlisi. Maduració del RNA. Transcrit primari i processament (splicing). Eliminació d’introns. |
| 11. Abszimes. Enginyeria d’enzims |
Anticossos catalítics. Enzims artificals. Disseny d’enzims. Enzims immobilitzats. |
| 12. Aplicació de l’enzimologia |
Enzims de restricció. Enzims en el diagnòstic clínic. Teràpia enzimàtica. Enzims com a reactius. Eines d’anàlisis. Biosensors. Activitat d’aigua i enzims en medis orgànics. Aplicacions industrials dels enzims. |
Assignatures
